超低分子量蛋白电泳试剂盒（货号：RTD6120）

●     产品组成：

● 产品简介：

本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳（多肽电泳）全套试剂，可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶（8×10cm）。具有以下特点：

1 适用范围广：2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS，适用于多肽的变性和非变性电泳。

2 分辨率高：凝胶缓冲液独特配方，可以有效分离1-5kD多肽。

3 稳定性高：凝胶缓冲液pH为中性，存放时间长。

4 使用方便：配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝胶。

● 贮存和效期：

按照标签温度贮存；开封后有效期一年。

● 使用说明：

一. 10% APS配制：

10% APS配制-5 ml：将APS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

二. 制胶：

I 配制分离胶

1．按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

表一  （一块1 mm mini胶用量）*

注： * 如非必须，不要使用厚度1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。

** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。

表二 超低凝胶制备凝固时间表

2．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层，使凝胶表面保持平整。

3．静置5-10分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制浓缩胶

去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

1．按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

2．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

3．静置20-30分钟待凝胶聚合

三. 电泳：

1. 10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制：

将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干净的一升烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500ml 10×TTS缓冲液。

表三 1×TTS缓冲液配制

注：伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TTS缓冲液。

2. 样品处理：

  待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]等体积混合，75℃处理5-10分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液，根据说明书上样（预染Marker不能加热处理，非预染Marker上样前一般要75℃处理5-10分钟）。

将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品（已经过处理）加入点样孔，稳压电泳（表四），至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

表四 多肽电泳条件

四. 染色（使用组分9-FastBlue蛋白染色液）：

● 用前必读：

1 使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。

2以下“使用方法”是针对0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。

● 使用方法：

1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），条带1-2分钟即可见。

2. 摇床上常温摇动10-15分钟。

3. 观察结果。

● 注意事项：

1. 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长染色的时间。

2. 常规染色所需的漂洗，固定，脱色步骤都无必要。

3. 本染色液可以重复利用1-2次，敏感性会有轻微下降，请延长染色时间。

4. 本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，常温密封保存。

 缓冲液配方：

1. 10x Tricine-Tris-SDS缓冲液 (1 L)    (Cat No:CB010P) 

组分浓度：1 MTris,1 MTricine, 1% SDS

Tris base 121.1 g

Tricine    179.2 g

SDS         10 g

ddH₂O      to1 L 

Do not adjust the pH (~pH 8.3)

 

2. 2×Tricine蛋白样品加样缓冲液（10ml）  (Cat No:TP050)

组分浓度：100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT，0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250

1ml 1MTris-Cl pH6.8

2.4ml 甘油

0.8g  SDS

0.31gDTT

2mg 考马斯亮蓝G-250

用灭菌ddH₂O定容至10ml

混匀分装-20℃贮存备用