PCK2基因敲除慢病毒
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| 产品名称 | PCK2基因敲除慢病毒 |
|---|---|
| 品牌 | 碧云天Beyotime |
| 货号 | L00357 |
PCK2 Knockout Lentivirus(PCK2基因敲除慢病毒)是一种感染动物细胞后可以同时表达Cas9、目的基因sgRNA和puromycin抗性基因的慢病毒。本产品用于在动物细胞中基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因，并且本慢病毒中sgRNA的有效性已经通过T7EI法的验证。
本慢病毒基因序列的关键图谱信息请参考图1。本慢病毒可用于感染细胞或组织并进行目的基因的CRISPR/Cas9敲除。
图1. 可同时表达sgRNA、Cas9和puromycin抗性的本慢病毒其基因序列的关键图谱信息。
用于包装本慢病毒的质粒中的sgRNA基于碧云天研发的CRISPR/Cas9 sgRNA快速筛选和验证体系获得，sgRNA的有效性已经通过T7EI法验证。
本慢病毒用于实验时，建议同时选购无任何靶向的对照慢病毒
Control Knockout Lentivirus (L00015)
或靶向GFP的对照慢病毒GFP Knockout Lentivirus (L00017)
。碧云天同时提供基于CRISPR/Cas9技术的
PCK2基因敲除的质粒(L00356 pLenti-PCK2-sgRNA)
、慢病毒(L00357 PCK2 Knockout Lentivirus)
、HEK293T细胞(L00358 PCK2 Knockout HEK293T Cells)
、HEK293T敲除细胞的RIPA裂解液(L00359 PCK2 Knockout HEK293T RIPA Lysate)
、HEK293T敲除细胞的Trizol裂解液(L00360 PCK2 Knockout HEK293T Trizol Lysate)
等产品，具体请在碧云天网站查询或在本产品网页点击相应产品。PCK2基因的基本信息如下：
| Species | Gene Symbol | Gene ID | GenBank Accession | Transcript |
| Human | PCK2 | 5106 | BC001454 | NM_001018073 |
| About the gene | |
| Official Symbol | PCK2 |
| Previous Symbol | - |
| Official Full Name | phosphoenolpyruvate carboxykinase 2, mitochondrial |
| Synonyms | PEPCK; PEPCK2 |
| Location | 14q11.2-q12 |
| Gene Type | protein-coding gene |
| Uniprot ID | Q16822 |
| Pathway/Library | cAMP & Ca Signaling Pathway Related Genes Library |
| Gene Summary | This gene encodes a member of the phosphoenolpyruvate carboxykinase (GTP) family. The protein is a mitochondrial enzyme that catalyzes the conversion of oxaloacetate to phosphoenolpyruvate in the presence of GTP. A cytosolic form encoded by a different gene has also been characterized and is the key enzyme of gluconeogenesis in the liver. The encoded protein may serve a similar function, although it is constitutively expressed and not modulated by hormones such as glucagon and insulin that regulate the cytosolic form. Alternatively spliced transcript variants have been described. |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| L00357 | PCK2 Knockout Lentivirus | 108 TU |
| — | 说明书 | 1份 |
-80℃保存，至少一年有效。
注意事项：碧云天拥有sgRNA序列的知识产权，如果需要sgRNA序列，请在订购后发送邮件向
info@beyotime.com
索取。sgRNA序列信息与本慢病毒，未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。使用者在发表研究论文或结果时，应注明来源。对于非目录产品的CRISPR基因敲除用的慢病毒的定制，可联系碧云天技术服务
service@beyotime.com
。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
1.慢病毒的感染：
a.确定puromycin的筛选浓度：待感染的细胞按一定密度铺在12孔或24孔中，按照0、0.2、0.5、1、1.5、2、3、4、5µg/ml这样的浓度测试细胞对puromycin的敏感性，推荐使用碧云天的
Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) (ST551)
。两天后细胞全部死亡的最低浓度即为该细胞的puromycin筛选浓度，具体步骤参考碧云天该产品的使用说明：。
b.慢病毒感染细胞：按实验需要将细胞铺板(如12孔板)，细胞数以第2天密度约50%为宜。设置非感染细胞组、对照组和基因敲除组。37℃培养过夜后，培养液中加入5~10μg/ml的Polybrene (
C0351
/ST551
)。病毒感染前，从-80℃冰箱取出病毒后冰浴融化，参考相关文献或者根据预实验得到的MOI值加入适量病毒，对于未浓缩的病毒，可以直接按0.5ml/孔加入细胞，对于浓缩或测定滴度的病毒，一般100µl/孔或107 TU已经足够，轻轻摇匀，37℃继续培养。两天后，吸除含病毒的培养液，换为新鲜的含一定浓度的puromycin的培养液进行筛选，一般筛选2天后，非感染细胞组细胞逐渐死去，加入病毒组存活率比较高，就可以收集部分细胞检测目的蛋白的表达或进行其它实验。培养过程中，可以将细胞转至6孔板或10cm培养皿进行扩大培养。一周之后，puromycin浓度可减半。如果有必要后续可以通过将细胞稀释至2.5个/ml，然后按照每孔200µl接种到96孔板中(每孔平均0.5个细胞)，筛选单克隆细胞株。病毒感染的方法可参考Polybrene (C0351)
的使用说明：基因编辑的鉴定：
a.对于多克隆细胞，可以通过T7 Endonuclease I (T7EI)进行鉴定，即提取细胞的基因组DNA，在sgRNA序列两边设计引物进行PCR扩增，然后进行T7EI酶切，具体请参考碧云天的
T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) (D7080)
或基因组编辑突变检测试剂盒(D0508)
；也可以通过相应的抗体进行检测。b.对于单克隆细胞，可通过PCR扩增出sgRNA靶向的基因片段后进行常规测序的方式进行验证，同时也可以使用相应的抗体进行检测。
相关产品：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| L00015 | Control Knockout Lentivirus | 108 TU |
| L00017 | GFP Knockout Lentivirus | 108 TU |
| C0222 | 青霉素-链霉素溶液(100X) | 100ml |
| C0351-1ml | Polybrene (Hexadimethrine Bromide) | 1ml |
| C0351-50mg | Polybrene (Hexadimethrine Bromide) | 50mg |
| D0508S/M | 基因组编辑突变检测试剂盒 | 25/100次 |
| D7080S/M/L | T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) | 250/1250/5000U |
| ST551-10mg | Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) | 10mg/ml×1ml |
| ST551-50mg | Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) | 10mg/ml×5ml |
| ST551-250mg | Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) | 250mg |
| ST1380-500mg | Polybrene (≥94%, Reagent grade) | 500mg |
| ST1380-2g | Polybrene (≥94%, Reagent grade) | 2g |
| ST1380-10g | Polybrene (≥94%, Reagent grade) | 10g |
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