BeyoIHC™ p21 Rabbit Monoclonal Antibody
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| 产品名称 | BeyoIHC™ p21 Rabbit Monoclonal Antibody |
|---|---|
| 品牌 | 碧云天Beyotime |
| 货号 | AG8586 |
| 来源 | 用途 | 交叉反应性 | 理论分子量 | 实际分子量 |
| Rabbit | IHC, FC | [[Human]] | 18kDa | - |
IHC-P, Immunohistochemistry-paraffin; IHC-Fr, Immunohistochemistry-frozen; IF, Immunofluorescence;
ICC, Immunocytochemistry; WB, Western blot; FC, Flow Cytometry.
建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)：
| IHC-P | IHC-Fr | IF/ICC | WB | FC |
| 1:100-1:200 | N/D (not determined) | N/D | N/D | 1:50-1:200 |
BeyoIHC™系列抗体是经过测试适用于免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)的高品质抗体，也称病理抗体，很大一部分为重组兔单克隆抗体(Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody)，通过先进的兔单克隆抗体技术平台研发并生产，无需获取动物的脾脏，仅需分离抗原特异性B细胞并通过基因工程方法克隆抗体基因，然后在哺乳动物细胞中重组表达并最终纯化获得[1-2]。
BeyoIHC™抗体灵敏度更高，背景更低，染色更清晰，定位更精准。BeyoIHC™系列抗体通过反复的筛选和测试，确保灵敏度高、背景低、染色效果好[3]。
BeyoIHC™抗体特异性更强，染色结果更为准确。BeyoIHC™系列抗体大部分都是精心筛选的高效价单克隆抗体，是由单个B细胞淋巴瘤表达，只针对一个抗原表位发生特定的免疫反应，应用于免疫组化时特异性更强，染色结果更为准确[3]。
BeyoIHC™抗体一致性更好，批次间差异更小，结果重复性更好。BeyoIHC™系列抗体很大一部分是重组抗体，具有确定的抗体序列，使用不含任何动物源性物质培养液的哺乳细胞表达体系，生产的可重复性、一致性高，批次间差异小，可避免杂交瘤细胞制备过程中的基因丢失、基因突变和细胞株漂移等问题，所制备的重组抗体的重复性更好[3]。
BeyoIHC™系列抗体主要用于福尔马林固定石蜡包埋(Formalin fixed paraffin embedded, FFPE)样品的免疫组织化学染色(Immunohistochemistry-paraffin or Immunohistochemistry paraffin-embedded, IHC-P)。对于冰冻切片免疫组织化学(Immunohistochemistry frozen sections, IHC-Fr)、细胞免疫荧光(Immunofluorescence, IF)或免疫细胞化学(Immunocytochemistry, ICC)未经测试(Not determined)。同时，BeyoIHC™系列抗体可识别人的相应蛋白，对于小鼠等其它种属很大一部分未经测试。对于未经测试的应用及种属样品，理论上有可能是可以检测的，但须用户自行测试。
BeyoIHC™系列抗体配套提供了免疫染色一抗稀释液，可以用于IHC检测或其它适当用途时的一抗稀释。为进一步提高信噪比，推荐使用
QuickBlock™免疫染色一抗稀释液(P0262)
、SignalUp™免疫染色一抗稀释液(P0277)
用于IHC检测。抗体详细信息如下:
| About this Antibody | |
| Name | BeyoIHC™ p21 Rabbit Monoclonal Antibody |
| Category | Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody (mAb); Primary antibody; IHC抗体 |
| Isotype | IgG |
| Clone number | BA1239 |
| Purification method | Protein A affinity purification |
| Positive samples | - |
| Cellular location | Nucleus |
| Customer validation | - |
| Epitope retrieval | Heat induced epitope retrieval with Tris-EDTA buffer (pH 9.0). |
| About the Immunogen | |
| Immunogen | Synthetic peptide corresponding to p21 residues within aa1-100 of p21 was used as an immunogen. |
| Sequence | - |
| Gene ID | 1026 |
| SwissProt | P38936 |
| Synonyms | CAP20; CDKN1; CIP1; MDA-6; P21; SDI1; WAF1; p21CIP1; CDKN1A |
| Category | G1/S Checkpoint; G2M/DNA Damage Checkpoint; PI3K/Akt Signaling; AMPK Signaling |
| Background | The tumor suppressor protein p21 Waf1/Cip1 acts as an inhibitor of cell cycle progression. It functions in stoichiometric relationships forming heterotrimeric complexes with cyclins and cyclin-dependent kinases. In association with CDK2 complexes, it serves to inhibit kinase activity and block progression through G1/S. However, p21 may also enhance assembly and activity in complexes of CDK4 or CDK6 and cyclin D. The carboxy-terminal region of p21 is sufficient to bind and inhibit PCNA, a subunit of DNA polymerase, and may coordinate DNA replication with cell cycle progression. Upon UV damage or during cell cycle stages when cdc2/cyclin B or CDK2/cyclin A are active, p53 is phosphorylated and upregulates p21 transcription via a p53-responsive element. Protein levels of p21 are downregulated through ubiquitination and proteasomal degradation. |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| AG8586 | BeyoIHC™ p21 Rabbit Monoclonal Antibody | 50µl |
| AZ060 | 免疫染色一抗稀释液 | 10ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存，一年有效。免疫染色一抗稀释液也可以4℃保存，长期不使用推荐-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
注意事项：如果本抗体用于免疫组化(IHC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常可以重复使用1-5次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000×g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
提供的免疫染色一抗稀释液也可以用于Western blot (WB)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，推荐使用
Western一抗稀释液(P0023)
。抗原修复过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
请根据抗体的实际用途选择相应的使用方法。相关步骤仅供参考，实际可尝试使用实验室习惯方法或根据实验目的进行条件的优化。
1.免疫染色：
a.石蜡切片样品的准备(Sample preparation)
(a)脱蜡：将切片放入二甲苯中脱蜡5分钟，更换成新鲜的二甲苯再脱蜡5分钟，无水乙醇5分钟，更换成新鲜的无水乙醇5分钟，95%乙醇5分钟，80%乙醇1分钟，70%乙醇1分钟，蒸馏水洗1-5分钟。
(b)抗原修复：一般使用加热抗原修复(Heat-induced epitope retrieval, HIER)的方法进行抗原修复。根据不同的抗原和抗体，可以选择抗体详细信息表格中建议的抗原修复液，或碧云天的
Tris-EDTA抗原修复液(50X, pH9.0) (P0084)
、EDTA抗原修复液(50X) (P0085)
、柠檬酸钠抗原修复液(50X) (P0081)
及其它抗原修复液(P0083
/P0086
/P0088)
中。直接取适量抗原修复液于适当容器(例如染色缸等)中，抗原修复液以没过切片为宜，加热至沸腾后将放有切片的染色架浸入修复液中，持续加热15分钟后关火。或者在微波炉内进行抗原修复，抗原修复液以没过切片为宜，中火10分钟至沸腾，停火10分钟保温再转中低火7分钟。自然冷却至室温后，取出切片置于免疫染色洗涤液(P0106)
或PBS (C0221A)
中洗涤3次，每次5分钟。切片稍甩干后用免疫组化笔在组织周围画圈。b.封闭(Blocking)
首先加入
内源性过氧化物酶封闭液(P0100A)
，室温封闭5-10分钟后，吸尽内源性过氧化物酶封闭液，蒸馏水冲洗，PBS清洗5分钟，共清洗两次。加入免疫染色封闭液(P0102)
或QuickBlock™免疫染色封闭液(P0260)
，室温封闭30分钟。如果背景较高，可以4℃封闭过夜。注1：从封闭开始所有的步骤，一定要注意样品的保湿，避免样品的干燥，否则极易产生较高的背景。
注2：在整个免疫染色过程中推荐使用碧云天的
BeyoShaker™数字式翘板摇床(E6673)
，侧向摆动速度比较缓慢，而且也容易让溶液覆盖样品。如果样品比较容易脱落，也可以把所有的步骤放置在桌面上静止进行，即封闭、抗体孵育、洗涤等步骤均不需摇动，但静止操作时宜适当延长作用时间或次数。c.一抗孵育(Primary antibody incubation)
(a)参考一抗的说明书，按照适当比例用提供的免疫染色一抗稀释液或
QuickBlock™免疫染色一抗稀释液(P0262)
稀释一抗。(b)用
微型台式真空泵(E0110
/E0113)
等吸尽封闭液，立即加入稀释好的一抗，室温在摇床上缓慢摇动孵育0.5-1小时，如果一抗孵育1小时效果不佳可4℃孵育过夜。(c)回收一抗。加入免疫染色洗涤液，在摇床上缓慢摇动洗涤5分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
d.二抗孵育(Secondary antibody incubation)
(a)参考二抗的说明书，用
免疫染色(非荧光)二抗稀释液(P0110)
或QuickBlock™免疫组化染色二抗稀释液(P0267)
稀释辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗，如辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L) (A0208)
，辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (A0216)
等。也可根据具体实验情况使用生物素(Biotin)或碱性磷酸酯酶(AP)标记的二抗，以上二抗可向碧云天订购。(b)吸尽洗涤液，立即加入稀释好的二抗，室温避光孵育0.5-1小时，若短时间二抗孵育效果不佳，可适当延长二抗孵育时间。
(c)回收二抗。加入免疫染色洗涤液，在摇床上缓慢摇动洗涤5分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高，可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
e.蛋白检测(Detection of proteins)
使用DAB法显色，如
DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(P0202
/P0203)
，按照说明配制DAB染色工作液，加入适量DAB染色液，确保能够充分覆盖样品样本，避光室温显色3-30分钟，根据实际情况在显微镜下观察显色状态调整样本染色时间。也可根据具体实验情况选择辣根过氧化物酶标记Streptavidin (A0303
/A0305)
、碱性磷酸酯酶标记Streptavidin (A0312)
、BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(C3206)
、SABC-HRP Kit (P0603
/P0612
/P0614)
或SABC-AP Kit (P0606
/P0625
/P0628)
等进行检测。如有需要复染，可使用苏木素染色液(C0107)
孵育3-5分钟，后续进行分化、冲洗返蓝。f.镜检拍照(Microscopic examination and photography)
依次将切片放入95%乙醇浸泡脱水30秒，更换新鲜95%乙醇浸泡脱水30秒，无水乙醇浸泡脱水1分钟，更换新鲜无水乙醇浸泡脱水1分钟，二甲苯中透明5分钟，更换新鲜二甲苯透明5分钟，共透明三次。使用中性树胶封片，室温风干后，光学显微镜下拍照。
2.其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
3.本抗体相关应用的代表性图片请参考下图。
Immunohistochemistry of formalin fixed paraffin embedded human cervix using BeyoIHC™ p21 monoclonal antibody at dilution of 1:200.
参考文献：
1.Weber J, Peng H, Rader C. Exp Mol Med. 2017. 49(3):e305.
2.Seeber S, Ros F, Thorey I, Tiefenthaler G, Kaluza K, et al. PLoS One. 2014. 9(2):e86184.
3.Zhang Z, Liu H, Guan Q, Wang L, Yuan H. Front Immunol. 2017. 8:494.
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| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
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| A0258 | 碱性磷酸酯酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L) | 0.5ml |
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| A0288 | 生物素高效标记山羊抗小鼠IgG(H+L) | 0.5ml |
| A0305 | 辣根过氧化物酶标记Streptavidin | 0.2/1/5ml |
| A0308 | Biotin标记辣根过氧化物酶 | 0.2ml |
| A0312 | 碱性磷酸酯酶标记Streptavidin | 0.2ml |
| C3206 | BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒 | 共100ml |
| P0081 | 柠檬酸钠抗原修复液(50X) | 100ml |
| P0083 | 改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X) | 100ml |
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| P0085 | EDTA抗原修复液(50X) | 100ml |
| P0086 | 柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40X) | 125ml |
| P0088 | 通用型强力抗原修复液(10X) | 100ml |
| P0096 | 免疫染色通透液(Triton X-100) | 100/500ml |
| P0098 | 免疫染色固定液 | 100/500ml |
| P0099 | 4%多聚甲醛固定液 | 100/500ml |
| P0100A | 内源性过氧化物酶封闭液 | 100ml |
| P0100B | 内源性过氧化物酶强力封闭液 | 100ml |
| P0100C | 内源性碱性磷酸酶封闭液(20X) | 6ml |
| P0101 | 生物素检测封闭试剂盒 | 200次 |
| P0102 | 免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0103 | 免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0106 | 免疫染色洗涤液 | 250ml |
| P0202 | DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒 | 共20ml |
| P0260 | QuickBlock™免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0262 | QuickBlock™免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
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| P0603 | SABC-HRP Kit (IHC, ICC, Blotting & ELISA) | 1000次 |
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| FPP06B | Liquid Blocker Super PAP Pen (免疫组化笔, 蓝色) | 1个/袋 |
| FPP06R | Liquid Blocker Super PAP Pen (免疫组化笔, 红色) | 1个/袋 |
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