皮肤组织蛋白提取试剂盒
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| 商品名称 | 皮肤组织蛋白提取试剂盒 |
|---|---|
| 品牌 | 贝博生物 |
| 货号 | BB-31612 |
| 保存温度 | 2-8℃ 保存 |
| 注意事项 | 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 |
| 有效期 | 一年 |
| 检测方法 | WB等 |
| 适用样本 | 皮肤组织 |
| 产品特点 | 1.提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。 2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。 3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。 4.总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。 5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。 |
| 产品应用 | WB等 |
| 仪器准备 | 1.离心机 2.振荡器 3.匀浆机/匀浆器 4.涡旋混匀器 5.移液器 6.冰箱 7.冰盒 |
| 试剂准备 | PBS缓冲液 蛋白定量试剂盒 |
| 耗材准备 | 1.离心管 2.吸头 3.一次性手套 |
| 使用注意事项 | 1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 4.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。 5.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 6.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。 |
| 使用方法 | 1. 提取液准备： 每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物B和2ul蛋白酶抑制剂混合物C，混匀后置冰上备用。 2. 取100-200mg皮肤组织样本，用PBS洗干净，然后用手术剪刀尽可能剪碎，加入500ul蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。 3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡30-40分钟。 4. 在4℃，10000-14000×g条件下离心15分钟。 5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到皮肤组织蛋白。 6. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。 |
| 常见问题分析 | 1.蛋白浓度低？ 处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。 皮肤组织蛋白质含量较低，适当加大组织上样量。 2.用什么方法定量蛋白？ 建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。 |
| 参考文献 | 1.Guoying Miao, Li Sun, Baoguo Liu, et al. MMP9 and RECK expression in cutaneous lichen planus Int J Clin Exp Pathol 2016 |
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